CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8(化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物(Formazan)。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數(shù)量，在一定細胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細胞數(shù)成正比?？衫眠@一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。
技術(shù)應(yīng)用
藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗及生物因子的活性檢測等。
技術(shù)優(yōu)勢
1、酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾;
2、細胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標儀讀數(shù)從而找到最佳測定時間;
3、檢測時間短;
4、非常適合批量樣品檢測;
5、檢測試劑很穩(wěn)定。
注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加 CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
活力計算
*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力
活力計算：細胞活力×(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)] ×100
A(加藥)：具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白)：具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A(0加藥)：具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
