原型物種:人
來源:物理方法和藥物
模式動物品系:SPF級SD大鼠,健康,雄性,體重為250g-300g。
實驗分組:實驗分六組:正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組。
實驗周期:4-6 weeks
建模方法
模型建立:SD大鼠均采用1%戊巴比妥鈉40μg/g腹腔內(nèi)注射麻醉,麻醉后繼而固定于腦立體定位儀上。按照大鼠腦立體定位圖譜,以前囟為零起點,前囟后3.5 mm處為穿刺點,中線右側(cè)旁開2mm,而后牙科鉆鉆開顱骨,采用微量注射器自腦表面垂直進(jìn)針3mm,即:(AP= -3.5 mm, ML=2.0 mm, DV=3.0 mm),雙側(cè)海馬CA1區(qū)緩慢勻速注射Aβ1-40各10 μg (1 μL),留針5 min,退針后縫合傷口。造模后3d后,開始尾靜脈注射,注射生理鹽水,大鼠每只給藥100μl/次/d,連續(xù)給藥21d后,進(jìn)行水迷宮行為學(xué)檢測。
應(yīng)用:疾病模型用于阿爾茲海默癥的藥物研發(fā)
模型評價
1.神經(jīng)功能缺失體征評分
參考Longa及Bederson的5分制法在動物麻醉清醒后24h進(jìn)行評分,分值越高,說明動物行為障礙越嚴(yán)重。
0分:無神經(jīng)損傷癥狀
1分:不能完全伸展對側(cè)前爪
2分:向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈
3分:向?qū)?cè)傾倒
4分:不能自發(fā)行走,意識喪失
2.TTC染色
麻醉小鼠后,取小鼠腦組織,放入-20℃冰箱冷凍30min。用PBS配置1% TTC(W/V),37℃水浴至TTC溶解,將凍好的腦組織切片,置于10ml TTC溶液中,37℃恒溫孵育10min。不時翻動腦片,使組織均勻染色。正常腦組織染色后呈鮮紅色,而梗死區(qū)呈蒼白色。
組織病理學(xué)
取腦后用4%多聚甲醛溶液固定,蔗糖溶液脫水后,經(jīng)OCT包埋做冰凍切片,切片10um,做尼氏染色,可做梗死面積的評價。
尼氏體(Nissl body):是胞質(zhì)內(nèi)的一種嗜堿性物質(zhì),廣泛見于各種神經(jīng)元,但其形狀大小和數(shù)量則各有差異。在生理情況下,尼氏體大而數(shù)量多,反映神經(jīng)細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的功能較強,在神經(jīng)元受損時,尼氏體的數(shù)量可減少甚至消失。
統(tǒng)計學(xué)分析
應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x ±s)表示,采用t檢驗,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05表示有顯著差異。