一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
推薦用近交系小鼠，18-22g，單一性別，每組10-15只。
二、劑量分組及受試樣品給予時(shí)間
實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)陰性對(duì)照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個(gè)劑量組，另設(shè)二個(gè)劑量組，必要時(shí)設(shè)陽性對(duì)照組。
受試樣品給予時(shí)間30天，必要時(shí)可延長至45天。免疫模型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)間可適當(dāng)延長。
三、試驗(yàn)項(xiàng)目
1.體重
2.臟器/體重比值測(cè)定：胸腺/體重比值，脾臟/體重比值
3.細(xì)胞免疫功能測(cè)定：小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)
4.體液免疫功能測(cè)定：抗體生成細(xì)胞檢測(cè)，血清溶血素測(cè)定
5.單核—巨噬細(xì)胞功能測(cè)定：小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
6.NK細(xì)胞活性測(cè)定
四、結(jié)果判定
1.有助于增強(qiáng)免疫力功能判定：在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核—巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性四個(gè)方面任兩個(gè)方面結(jié)果陽性，可判定該受試樣品具有有助于增強(qiáng)免疫力功能作用。
2.其中細(xì)胞免疫功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，或任一個(gè)實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量組結(jié)果陽性，可判定細(xì)胞免疫功能測(cè)定結(jié)果陽性。
3.體液免疫功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，或任一個(gè)實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量組結(jié)果陽性，可判定體液免疫功能測(cè)定結(jié)果陽性。
4.單核—巨噬細(xì)胞功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，或任一個(gè)實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量組結(jié)果陽性，可判定單核—巨噬細(xì)胞功能結(jié)果陽性。
5.NK細(xì)胞活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)的一個(gè)以上劑量組結(jié)果陽性，可判定NK細(xì)胞活性結(jié)果陽性。
五、實(shí)驗(yàn)方法
1.ConA 誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)
當(dāng)T淋巴細(xì)胞受ConA刺激后發(fā)生母細(xì)胞發(fā)生增殖反應(yīng)，活細(xì)胞特別是增殖細(xì)胞中的線粒體水解酶可將MTT(一種淡黃色的唑氮鹽)分解為蘭紫色結(jié)晶，其光密度值能反映細(xì)胞的增殖情況。
2.遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)
2.1 二硝基氟苯誘導(dǎo)小鼠DTH(耳腫脹法)
二硝基氟苯(DNFB)稀釋液可與腹壁皮膚蛋白結(jié)合成完全抗原，由此刺激 T 淋巴細(xì)胞增殖成致敏淋巴細(xì)胞。4～7天后再將其涂抹于耳部進(jìn)行抗原攻擊，使局部腫脹，一般在抗原攻擊后24～48h達(dá)高峰，其腫脹程度可以反應(yīng)映遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)程度。
2.2 綿羊紅細(xì)胞(SRBC)誘導(dǎo)小鼠DTH(足跖增厚法)
SRBC可刺激T淋巴細(xì)胞增殖成致敏淋巴細(xì)胞，4天后，當(dāng)再以SRBC攻擊時(shí)，攻擊部位出現(xiàn)腫脹，其腫脹程度可反映遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)程度。
3.抗體生成細(xì)胞檢測(cè)(Jerne改良玻片法)
經(jīng)過綿羊紅細(xì)胞(SRBC)免疫的小鼠脾細(xì)胞懸液與一定量的SRBC混合，在補(bǔ)體參與下，使分泌抗體的脾細(xì)胞周圍的SRBC溶解，形成肉眼可見的空斑。溶血空斑數(shù)可反映抗體生成細(xì)胞數(shù)。
4.血清溶血素的測(cè)定
4.1 血凝法
用SRBC免疫動(dòng)物后，產(chǎn)生抗SRBC抗體(溶血素)，利用其凝集SRBC的程度來檢測(cè)溶血素的水平。
4.2 半數(shù)溶血值(HC50)的測(cè)定
用SRBC免疫動(dòng)物后，血清中出現(xiàn)SRBC抗體(溶血素)，在補(bǔ)體參與下，與SRBC一起孵育，可發(fā)生溶血反應(yīng)，釋放血紅蛋白，通過測(cè)定血紅蛋白含量反映動(dòng)物血清中溶血素的含量。
5.小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)
在一定范圍內(nèi)，體內(nèi)碳顆粒被清除速率與血碳濃度呈指函數(shù)關(guān)系。
以血碳濃度對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，兩者呈直線關(guān)系。此直線斜率(K)可表示吞噬速率。動(dòng)物肝、脾重量影響吞噬速率，一般以校正吞噬指數(shù)a表示。
6.小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
6.1 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(滴片法)
利用巨噬細(xì)胞對(duì)光滑表面如玻璃表面具有粘附的特性，將含有巨噬細(xì)胞的腹腔液滴于載玻片上，加入雞紅細(xì)胞，孵育一定時(shí)間后，沖洗掉未粘附的細(xì)胞，固定染色，在顯微鏡下計(jì)數(shù)吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)，據(jù)此判定巨噬細(xì)胞的吞噬能力。
6.2 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半體內(nèi)法)
在體內(nèi)腹腔巨噬細(xì)胞能吞噬雞紅細(xì)胞。據(jù)此判斷巨噬細(xì)胞的吞噬功能。
7.NK細(xì)胞活性測(cè)定
正常情況下，活細(xì)胞胞漿內(nèi)的含有LDH不能透過細(xì)胞膜，當(dāng)細(xì)胞受到NK細(xì)胞的殺傷后，LDH釋放到細(xì)胞外。LDH可使乳酸鋰脫氫，進(jìn)而使NAD還原成NADH，后者再經(jīng)遞氫體吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)還原碘硝基氯化四氮唑藍(lán)(INT)，INT 接受H+被還原成紫紅色甲臜類化合物。在酶標(biāo)儀上用490nm比色測(cè)定。
