關(guān)于蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot，即 WB)，想必做蛋白實(shí)驗(yàn)的小伙伴們都不會陌生，作為免疫學(xué)中最常用的一種實(shí)驗(yàn)方法，其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過分析條帶大小和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。Western Blot 服務(wù)樣品收集及運(yùn)輸要求有哪些注意事項(xiàng)呢？
WB服務(wù)樣品與運(yùn)輸要求
細(xì)胞樣品：需要用PBS 清洗后，離心收集細(xì)胞沉淀，不能殘留PBS，封口膜封口，標(biāo)記，放入-80°C 冰箱保存，用干冰運(yùn)輸。
組織樣品：客戶取樣品后，盡量快速操作，放入液氮中速凍或者立刻存入-80°C 冰箱，樣品不能反復(fù)凍融。干冰運(yùn)輸。
蛋白樣品：未變性的蛋白需要存入-80，用干冰運(yùn)輸；Loading Buffer 煮沸的蛋白，需要提供蛋白濃度(濃度需在2ug/ul 以上)，用冰袋運(yùn)輸。
注：1)具體的樣品數(shù)量，根據(jù)客戶實(shí)驗(yàn)請隨時溝通；
2)把樣本放入自封袋或樣品盒中，備注：姓名，日期，樣品數(shù)等樣本信息，低溫運(yùn)輸。
樣品需要客戶自留，實(shí)驗(yàn)樣品不返還。
樣品的收集與保存
懸浮細(xì)胞
將細(xì)胞和培養(yǎng)液一起收集到15ml 離心管中，低速離心收集(1500rpm，離心5min)，加入PBS 輕輕吹打細(xì)胞，重復(fù)兩次，轉(zhuǎn)入1.5ml 或者2ml 離心管中，低速離心沉淀細(xì)胞，棄去PBS(需要細(xì)胞沉淀，不能殘留PBS)；做好標(biāo)記，每個樣本管用封口膜封口，立即保存于-70℃冰箱中(短時間保存)。
貼壁細(xì)胞
(1)胰酶消化收集細(xì)胞：用胰酶消化后(注意消化時間，防止消化過度對細(xì)胞造成損傷)，收集到15ml 離心管中，低速離心(1500rpm，離心5min)，棄去上清；加入PBS 輕輕吹打細(xì)胞，重復(fù)兩次，轉(zhuǎn)入1.5ml 或者2ml 離心管中，低速離心沉淀細(xì)胞，棄去PBS；做好標(biāo)記，每個樣本管用封口膜封口，立即保存于-70℃冰箱中(短時間保存)。
(2)細(xì)胞刮子收集細(xì)胞：對于某些蛋白(對胰酶比較敏感的蛋白或者實(shí)驗(yàn)特殊要求，如膜蛋白提取，不能用胰酶消化)，預(yù)留一些培養(yǎng)液，直接用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞(避免來回反復(fù)刮細(xì)胞，以減少對細(xì)胞的損傷)；收集到離心管中，低速離心(1500rpm，離心5min)，棄去上清；加入PBS 輕輕吹打細(xì)胞，重復(fù)兩次，轉(zhuǎn)入1.5ml 或者2ml 離心管中，低速離心沉淀細(xì)胞，棄去PBS；做好標(biāo)記，每個樣本管用封口膜封口，立即保存于-70℃冰箱中(短時間保存)。
組織樣本
組織樣本離開生物體后，應(yīng)盡快操作-特別是腸道、胰腺含酶量豐富的樣本，(5 分之內(nèi)，凍存管應(yīng)先做好標(biāo)記)，用預(yù)冷的PBS 或者生理鹽水清洗，盡量除去殘留血液，用濾紙把多余PBS 吸取干凈；以合適大小(50-100mg，約半個或一個黃豆粒大小，也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行調(diào)整)進(jìn)行分裝，做好標(biāo)記，立刻將樣本放入液氮中速凍后立刻轉(zhuǎn)入-70℃冰箱中或一直于液氮中保存，避免反復(fù)凍融。
補(bǔ)充說明
每一份樣本除去做實(shí)驗(yàn)外，請自己多預(yù)留幾份進(jìn)行備份。
(1)總蛋白：需要大于106 個細(xì)胞，正?？梢詸z測3 個指標(biāo)左右，如果檢測指標(biāo)較多，根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況準(zhǔn)備細(xì)胞數(shù)。組織樣本不少于30mg，若有特殊組織(如骨骼肌、肌肉或結(jié)締組織等)，請根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況多準(zhǔn)備樣本。
(2)膜蛋白：需要細(xì)胞量不少于107 個細(xì)胞，組織樣本不少于30mg；如果樣本是貼壁細(xì)胞，不能用胰酶消化收集細(xì)胞，可以采用細(xì)胞刮子收集細(xì)胞。
(3)胞核蛋白：凍存的組織和細(xì)胞可能會導(dǎo)致胞核蛋白減少，樣本要新鮮，不可用長期保存的樣本。
(4)檢測磷酸化蛋白：長期保存的樣本容易使磷酸化蛋白去磷酸化，而導(dǎo)致WB檢測不到磷酸化條帶，樣本要新鮮，樣本保存在一個月內(nèi)使用。
(5)細(xì)胞量：不同的細(xì)胞系形態(tài)不同，細(xì)胞生長密度也不同，請根據(jù)實(shí)際經(jīng)驗(yàn)確定培養(yǎng)容器和個數(shù)(以hela 細(xì)胞為例，兩個10cm 的培養(yǎng)皿長滿能達(dá)到1-2*107個細(xì)胞)，為了達(dá)到所需要的細(xì)胞量，可以在平時的傳代培養(yǎng)時進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，以確定培養(yǎng)容器的個數(shù)。
菲優(yōu)特檢測可提供蛋白、細(xì)胞等領(lǐng)域的服務(wù)，涵蓋蛋白純化表達(dá)、蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot，即 WB)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖與活性檢測等，為客戶提供“可靠、高效、準(zhǔn)確”的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，致力于讓所有的科研工作者都做“忘憂之人”!如您有相關(guān)項(xiàng)目的檢測需求，請直接聯(lián)系工程師 在線咨詢 獲取檢測文檔及報價單或撥打服務(wù)熱線 400-850-6066
