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STR鑒定

微衛(wèi)星標(biāo)記(Microsatellite)也稱為短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)或簡單重復(fù)序列(SSR),是廣泛分布在真核生物基因組中的簡單重復(fù)序列,一般由一個(gè)長2~6bp的核心序列經(jīng)多次串聯(lián)重復(fù)排列而成,重復(fù)次數(shù)大多在10~60次之間。近年來,大量研究表明STR基因分型方法是進(jìn)行細(xì)胞交叉污染和性質(zhì)鑒定的最有效和準(zhǔn)確的方法之一,STR分型高效快捷,結(jié)果精確,是非常重要的遺傳標(biāo)記,在基因定位、遺傳育種等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。STR基因分型應(yīng)用于細(xì)胞鑒定已被ATCC等機(jī)構(gòu)強(qiáng)烈推薦。美國的ATCC 細(xì)胞庫、德國的DSMZ細(xì)胞庫以及日本的JCRB細(xì)胞庫等為STR 分型提供了各細(xì)胞株的數(shù)據(jù)供比對(duì)。

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微衛(wèi)星位點(diǎn)通常通過PCR擴(kuò)增和電泳檢測,并根據(jù)片段大小分離等位基因進(jìn)行分析;擴(kuò)增后的等位微衛(wèi)星可以用多種方法檢測,傳統(tǒng)方法采用聚丙烯酰胺凝膠電泳加放射顯影或銀染的方法,費(fèi)時(shí)費(fèi)力效率低。利用ABI遺傳分析儀對(duì)熒光標(biāo)記的DNA片段進(jìn)行檢測,結(jié)合分子量內(nèi)標(biāo)進(jìn)行DNA片段長度計(jì)算,使STR分型變得高效快捷,結(jié)果也更加精確。

 STR鑒定實(shí)驗(yàn)流程 

1、實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì),包括熒光標(biāo)記的選擇,引物的設(shè)計(jì)、合成和標(biāo)記、內(nèi)標(biāo)的選用等。

2、預(yù)實(shí)驗(yàn):確定PCR反應(yīng)條件。

3、正式實(shí)驗(yàn):完成熒光PCR,并在測序儀上完成電泳掃描,數(shù)據(jù)采集,去掉低值數(shù)據(jù),分析結(jié)果、補(bǔ)充測序、完成分析。

4、對(duì)收集的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析,提供產(chǎn)物片段大小、數(shù)量多少的信息數(shù)據(jù)。

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